Děj se odehrává v obci Kamenice a vypráví o životních osudech lékařů soukromé gynekologické kliniky, jejich rodin a přátel. Postupně gynekologie ale ustupuje do pozadí a je nahrazena nejdříve prostředím pediatrie (hlavní lékařkou je zde MUDr. Páleníková), později především chirurgie. Hrdinové seriálu musí řešit každodenní peripetie, bojovat s intrikami a přesto pokaždé podat maximální výkon v boji o život pacienta. Současně se vyrovnávají i množstvím dramatických chvilek, které život kamenických lékařů přináší. Seriál vám ukáže spousty nových lásek, rozchodů, radostí i zklamání všech současných i nově příchozích aktérů.
Postavy: Gabriela Šímová (Sandra Nováková) – sestra na gynekologii, bývalá partnerka Adama Suka
MUDr. Zdena Tichá (Dana Morávková) – doktorka na chirurgii
Bc. Kristýna Tichá (Kristýna Janáčková) – sestra na plastické chirurgii
Marta Tichá (Vlasta Žehrová) – matka Kristýny
Marek Barna (Martin Holec) – syn Pavly Barnové, biologický syn Vladimíra Pusenského
MUDr. Pavla Barnová (Barbora Munzarová) – chirurg
Věra Barnová (Jitka Smutná) – tchyně Pavly Barnové, bývalá kuchařka U dvou růží
Jarek Barna (Zdeněk Junák) – bývalý manžel Věry Barnové
MUDr. Lukáš Beneš (Pavel Batěk) – chirurg, zaskakoval i jako pediatr, doktor RZP
Radomír Beneš (Martin Zahálka) – otec dr. Beneše, ústecký hejtman, později přítel Terezy Valšíkové-Hakenové
Vendulka Čížková-Holovská (Veronika Jeníková) – bývalá vrchní sestra gynekologického odd. nemocnice, v některých řadách seriálu sestra na plastické chirurgii, v poslední řadě seriálu na chirurgii.
Lída Drdová (Magdaléna Reifová) – sestra na gynekologii a chirurgii
Kryštof Dyk (Jakub Gottwald) – medik
MUDr. Dalibor Frynta (Jan Šťastný) – primář chirurgie (v minulosti dočasně suspendovaný na lékaře), bývalý partner Sylvy Petrové
Matyáš Frynta (Ladislav Hampl) – syn Dalibora Frynty z 1. manželství, partner Sylvy Petrové
MUDr. Pavel Getz – plastický chirurg z Prahy
MUDr. Petr Hanák (Radim Fiala) – nový lékař na chirurgii, bývalý vojenský lékař s praxí v zahraničních misích
MUDr. Tomáš Hruška (Jiří Langmajer) – postupně lékař, primář gynekologického odd., ředitel nemocnice a lékař na plastické chirurgii
Lucie Hrušková-Váchová (Ivana Jirešová) – barmanka, sestra Gity Petrové
Robert Jirka (Tomáš Polák) – syn Veroniky Jirkové, spolužák Marka Barny
Veronika Jirková (Adéla Gondíková) – bývalá vrchní sestra na chirurgii
Marie Johnsson (Michaela Dolinová) – sestra na gynekologii a majitelka vily v růžové zahradě
paní Kouřilová (Hana Gregorová) – podnikatelka v erotických službách
MUDr. Čestmír Mázl (Petr Rychlý) – primář gynekologicko - porodnického odd. nemocnice, soukromý gynekolog, nynípartner Magdy Tárové, se kterou má syna Mikuláše
Jakub Mázl (Ladislav Ondřej) – syn Čestmíra Mázla, přítel Katky Slavíkové
MUDr. Běla Páleníková-Valšíková (Zlata Adamovská) – pediatrička soukromé ordinace, má za sebou hodně zkrachovalých vztahů, se ženatými muži, nyníje však šťastnou manželkou Eduarda Valšíka
Ing. arch. Richard Petr (Aleš Procházka) – otec Sylvy Petrové, přítel Marie Johnsson
Sylva Petrová (Veronika Nová) – dcera Gity Petrové, ex-partnerka Dalibora Frynty,nynížije s Matyášem Fryntou
Dorka Poláková (Lucie Černíková) – barmanka
Olga Pusenská (Vendulka Křížová) – učitelka (Marka Barny…), manželka Vladimíra Pusenského (v rozvodovém řízení)
MUDr. Vladimír Pusenský (Milan Bahul) – chirurg, zástupce primáře, manžel učitelky Olgy Pusenské, nyní přítel vrchní sestry Elišky Slavíkové
Leopold Řeháček (Jan Vlasák) – manžel Věry Barnové, bývalý vrchní U dvou růží
Eliška Slavíková (Miluše Bittnerová) – nová vrchní sestra na chirurgii
Katka Slavíková (Michaela Doubravová) – její dcera, přítelkyně Jakuba Mázla
MUDr. Adam Suk (Josef Pejchal) – původně gynekolog, nyníchirurg, přítel Alenky Veverkové
MUDr. Magda Tárová (Markéta Plánková) – lékařka na chirurgii, vedoucí stanice plastické chirurgie, sestra Pavly Barnové, partnerka Čestmíra Mázla, nyní má syna Mikuláše.
MUDr. Zdena Tichá (Dana Morávková) - lékařka a ředitelka kamenické nemocnice
Zuzana Tichá-Pantoflíčková (Veronika Gajerová) – zdravotní sestra na pediatrii
Bobina Tomanová (Miriam Kantorková) – bývala zdravotní sestra, nyní vede nemocniční bufet, dobrá duše nemocnice
Martina Tvrdíková-Všetečková (Kristýna Fuitová-Nováková) – sestra na chirurgii,manželka Oskara Všetečky
Doc. MUDr. Eduard Valšík (Petr Štěpánek) – bývalý ředitel nemocnice, nyníje lékařem na chirurgii a také společně s Bělou, kterou nesmírně miluje, ordinuje v "Růžovce".
Jindřich Valšík (Vlastimil Zavřel) – stavitel, bratr Eduarda Valšíka
MUDr. Tereza Benešová (Monika Zoubková) – mladá chiruržka, dcera Eduarda, manželka hejtmana Beneše, mají dceru Alžbětku
Alenka Veverková (Lenka Zahradnická) – sestra na chirurgii
MUDr. Oskar Všetečka (Martin Písařík) – chirurg, manžel Martiny Tvrdíkové
MUDr. Monika Mandlová (Tereza Kostková) – doktorka na plastice
Anička Fryntová (Anna Stropnická) – dcera Dalibora Frynty, pobývala v Kanadě, nyní pomáhá v nemocnici
Menší role: MUDr. Karel Bílý (Igor Chmela) – bývalý ředitel nemocnice, nyní na ministerstvu
MUDr. Aleš Čížek (Ladislav Potměšil) – gynekolog soukromé ordinace i v nemocnici († v dílu 258)
Cecílie Valšíková (Zdena Herfortová) - manželka Jindřicha Valšíka, teta MUDr. Terezy Valšíková (†duben 2009)
Ing. Jan Haken (Martin Trnavský) – stavitel, bývalý manžel Terezy Valšíkové-Hakenové-Benešové, partner Pavly Barnové, přítel Vladimíra Pusenského († v dílu 280)
MUDr. Martina Hermanová (Anna Polívková) – lékařka na gynekologii, autorka detektivek
MUDr. Prokop Hrubý (Ondřej Sokol) – pediatr soukromé ordinace, nyní v Praze
MUDr. Vojta Kaňka (Michal Holán) – lékař
Bc. Tamara Kindlová (Helena Brabcová) – sestra na gynekologii pro alternativní porody
Mirka Kovaříková (Kristýna Kociánová) – sestra v soukromé ordinaci
MUDr. Marek Kroupa (David Suchařípa) – bývalý primář gynekologie
MUDr. Jan Pantoflíček (Ota Jirák) – primář pediatrie, manžel sestry Zuzany Pantoflíčkové
MUDr. Petr Pavlis (Jiří Štěpnička) – primář ARO, bývalý přítel Běly Páleníkové
MUDr. Gita Petrová (Daniela Šinkorová) – gynekoložka soukromé ordinace († v dílu 194)
Míša Prouzová (Magdalena Zimová) – sestra na gynekologii, přítelkyně ředitele Bílého
MUDr. Michal Šebek (Roman Zach) – praktický lékař soukromé ordinace, nyní s Ivou Šebkovou (Brázdovou) v Praze
Pavel Vácha (David Prachař) – hodný, ale nespolehlivý manžel Kamily
Kamila Váchová (Linda Rybová) – sestra v soukromé ordinaci
Markéta Vorlová (Jitka Čvančarová) – sestra na gynekologii, pediatrii, chirurgii, partnerka Prokopa Hrubého
MUDr. Jaroslav Ženíšek (Zdeněk Žák) – pediatr soukromé ordinace, bývalý milenec Běly Páleníkové
Seriál televize Nova Ordinace v Růžové Zahradě se stal jedním z nejúspěšnějších seriálu poslední doby. Existuje již 13 sérií.